於慎行，字無垢，東阿人。年十七，舉於鄉。禦史欲即鹿鳴宴冠之，以未奉父命辭。隆慶二年成進（jìn）士。改庶吉（jí）士，授編修。萬曆初，穆（mù）宗實錄成，進修撰，充日講官。故事，率以翰林大僚直日（rì）講，無及史官者。慎行與張位及王家屏、沈一貫、陳於陛鹹（xián）以史官得之，異數也。嚐講罷，帝出禦府圖畫，令講（jiǎng）官（guān）分題。慎行不善書，詩成，屬人書之，具以實（shí）對。帝悅，嚐大書「責難陳善」四字賜之，詞林（lín）傳為盛（shèng）事。
禦史劉台以劾張居正被逮，僚友（yǒu）悉避匿，慎行（háng）獨往視之。及（jí）居正奪情，偕同官具疏諫。呂（lǚ）調陽格之，不得上。居正聞（wén）而怒，他日（rì）謂慎行曰：「子吾所厚，亦為此耶？」慎行從容對曰：「正以公見厚故耳。」居正怫然。慎行尋以疾歸。居正卒，起故官。進左諭德（dé），日講如故。時居正已（yǐ）敗，侍郎丘蕣（shùn）往籍其家。慎行遺書，言居正（zhèng）母老，諸子覆巢（cháo）之下，顛沛（pèi）可傷（shāng），宜推明主帷蓋恩，全大臣簪履之誼（yì）。詞極懇摯，時論（lùn）韙之。由侍講學士擢禮（lǐ）部（bù）右侍郎。轉左（zuǒ），改吏部，掌詹事府。尋遷禮部尚（shàng）書。
慎行明習典製，諸大禮多所裁定。先是，嘉靖中孝（xiào）烈後升祔，祧仁宗。萬（wàn）曆改元，穆宗升祔（fù），複祧宣宗。慎行（háng）謂非禮，作太廟祧遷考，言：「古七廟之製，三昭三穆，與太祖（zǔ）之廟而七（qī）。劉歆（xīn）、王（wáng）肅並以（yǐ）高、曾、祖、禰及五世、六世為三昭三穆。其兄弟相傳，則同堂異室，不可為一世。國朝，成祖既為世室，與太祖俱百世不遷，則仁（rén）宗以下，必實曆六世，而後三昭三穆始備。孝宗與睿宗兄弟，武宗與世宗兄弟，昭穆同，不當各為一（yī）世。世宗升祔，距仁宗止六世，不（bú）當祧仁宗。穆宗升祔（fù），當祧仁宗（zōng），不（bú）當祧（tiāo）宣宗。」引（yǐn）晉、唐、宋故事為據，其言辨而核。事雖不行，識者服其知禮。又言：「南昌（chāng）、壽春等十（shí）六王，世次既遠，宜別祭陵園，不宜附享太廟。」亦寢不行。
十八年正（zhèng）月疏請早建東宮，出合講讀。及冬，又請。帝（dì）怒（nù），再嚴旨詰責。慎行（háng）不為懾，明日複言：「冊立，臣部職掌，臣（chén）等不言，罪（zuì）有所歸。幸速決大計，放歸田裏。」帝益不悅，責以要君疑上，淆亂國本，及僚屬皆（jiē）奪俸。山（shān）東鄉試，預傳（chuán）典試者名，已而果（guǒ）然。言者遂劾禮官，皆停俸。慎行引罪乞休。累章上（shàng），乃（nǎi）許。家居十餘年，中外屢薦，率報寢。
三十三（sān）年始起掌詹事府。疏辭，複留不下。居二年，廷推閣臣七人，首慎行。詔加太子少保（bǎo）兼東閣大學士，入（rù）參機務。再（zài）辭不允，乃就道。時（shí）慎（shèn）行已得（dé）疾。及（jí）廷（tíng）謝，拜起不如（rú）儀（yí），上疏（shū）請罪。歸臥於家，遂草遺疏，請帝親大臣、錄遺逸、補言官。數日卒，年六十三。贈太子太保，諡文定。
慎行學有原委，貫穿百家。神宗時，詞館中以慎行及（jí）臨胊馮琦文學為（wéi）一時冠。